药师十二神将是指守护诵持《药师经》者之十二位护法神。又称十二药叉大将、十二神王等，依佛典所载，这十二位誓愿护持药师法门、饶益众生的神将，在昼夜十二个时辰，及四季十二个月份，轮流率领眷属守护众生。十二神将的形象与我国民间流传的十二生肖有关。
佛典记载，佛行菩萨道时，发十二大愿，令诸有情者所求皆得。化身十二药叉大将，每一药叉为每一大愿的象征。每位药叉大将有七千药叉为其眷属，则为八万四千之守护神，转一切众生八万四千之烦恼，成八万四千之菩提。
一年十二月，每天十二时辰，十二神将轮流率领眷属守护众生，只要有《药师琉璃光如来本愿功德经》之处，或有人恭敬供养，称念受持药师琉璃光如来圣号，药叉大将及其眷属，悉皆保护守卫。解脱一切苦难，一切愿望所求皆得，称心如意。
十二药叉大将为药师琉璃光如来座前管理健康大将，凡人今世之身体健康皆由个人所属生肖之大将所管辖，善信可依个人生肖所属，祈求远离疾病与恶疾，诚心诚意祈祷庇佑健康，脱离苦难。